(Protočna citometrija, FCM) je ćelijski analizator koji mjeri intenzitet fluorescencije obojenih ćelijskih markera.To je visokotehnološka tehnologija razvijena na osnovu analize i sortiranja pojedinačnih ćelija.Može brzo da izmeri i klasifikuje veličinu, unutrašnju strukturu, DNK, RNK, proteine, antigene i druga fizička ili hemijska svojstva ćelija, i može se zasnivati na prikupljanju ovih klasifikacija.
Protočni citometar se uglavnom sastoji od sljedećih pet dijelova:
1 Protočna komora i fluidički sistem
2 Laserski izvor svjetlosti i sistem za oblikovanje zraka
3 Optički sistem
4 Elektronika, sistem za skladištenje, prikaz i analizu
5 Sistem za sortiranje ćelija
Među njima, laserska ekscitacija u laserskom izvoru svjetlosti i sistemu za formiranje zraka je glavno mjerenje fluorescentnih signala u protočnoj citometriji.Intenzitet ekscitacionog svjetla i vrijeme ekspozicije povezani su sa intenzitetom fluorescentnog signala.Laser je koherentni izvor svjetlosti koji može pružiti jednovalnu dužinu, visokog intenziteta i visoko stabilno osvjetljenje.To je idealan izvor pobudne svjetlosti za ispunjavanje ovih zahtjeva.
Između laserskog izvora i protočne komore nalaze se dva cilindrična sočiva.Ova sočiva fokusiraju laserski snop kružnog poprečnog preseka koji emituje laserski izvor u eliptični snop manjeg poprečnog preseka (22 μm × 66 μm).Laserska energija unutar ovog eliptičnog snopa distribuira se prema normalnoj distribuciji, osiguravajući konzistentan intenzitet osvjetljenja ćelija koje prolaze kroz područje laserske detekcije.S druge strane, optički sistem se sastoji od više setova sočiva, rupica i filtera, koji se grubo mogu podijeliti u dvije grupe: uzvodno i nizvodno od protočne komore.
Optički sistem ispred protočne komore sastoji se od sočiva i rupe.Glavna funkcija sočiva i otvora (obično dva sočiva i rupica) je fokusiranje laserskog snopa kružnog poprečnog presjeka kojeg emituje laserski izvor u eliptični snop manjeg poprečnog presjeka.Ovo distribuira energiju lasera u skladu sa normalnom distribucijom, osiguravajući konzistentan intenzitet osvjetljenja za ćelije u području laserske detekcije i minimizirajući smetnje od zalutalog svjetla.
Postoje tri glavne vrste filtera:
1: Dugopropusni filter (LPF) - propušta samo svjetlost sa talasnim dužinama većim od određene vrijednosti.
2: Short-pass filter (SPF) - propušta samo svjetlost sa talasnim dužinama ispod određene vrijednosti.
3: Bandpass filter (BPF) - dozvoljava prolazak samo svjetlosti u određenom opsegu talasnih dužina.
Različite kombinacije filtera mogu usmjeriti fluorescentne signale na različitim talasnim dužinama na pojedinačne fotomultiplikatorske cijevi (PMT).Na primjer, filteri za detekciju zelene fluorescencije (FITC) ispred PMT-a su LPF550 i BPF525.Filteri koji se koriste za detekciju narandžasto-crvene fluorescencije (PE) ispred PMT-a su LPF600 i BPF575.Filteri za detekciju crvene fluorescencije (CY5) ispred PMT-a su LPF650 i BPF675.
Protočna citometrija se uglavnom koristi za sortiranje ćelija.Sa napretkom kompjuterske tehnologije, razvojem imunologije i pronalaskom tehnologije monoklonskih antitijela, njena primjena u biologiji, medicini, farmaciji i drugim oblastima postaje sve raširenija.Ove aplikacije uključuju analizu stanične dinamike, ćelijsku apoptozu, tipizaciju ćelija, dijagnozu tumora, analizu efikasnosti lijekova itd.
Vrijeme objave: Sep-21-2023
