(Protočna citometrija, FCM) je analizator ćelija koji mjeri intenzitet fluorescencije obojenih ćelijskih markera. To je visokotehnološka tehnologija razvijena na osnovu analize i sortiranja pojedinačnih ćelija. Može brzo izmjeriti i klasifikovati veličinu, unutrašnju strukturu, DNK, RNK, proteine, antigene i druga fizička ili hemijska svojstva ćelija, a može se zasnivati na prikupljanju ovih klasifikacija.
Protočni citometar se uglavnom sastoji od sljedećih pet dijelova:
1 Protočna komora i fluidni sistem
2 Izvor laserske svjetlosti i sistem za oblikovanje snopa
3 Optički sistem
4 Elektronika, sistem za pohranu, prikaz i analizu
5 Sistem za sortiranje ćelija
Među njima, laserska ekscitacija u izvoru laserske svjetlosti i sistemu za formiranje snopa je glavno mjerenje fluorescentnih signala u protočnoj citometriji. Intenzitet ekscitacijske svjetlosti i vrijeme ekspozicije povezani su s intenzitetom fluorescentnog signala. Laser je koherentni izvor svjetlosti koji može osigurati osvjetljenje jedne talasne dužine, visokog intenziteta i visoke stabilnosti. To je idealan izvor ekscitacijske svjetlosti koji ispunjava ove zahtjeve.
Između laserskog izvora i protočne komore nalaze se dva cilindrična sočiva. Ova sočiva fokusiraju laserski snop kružnog poprečnog presjeka koji emituje laserski izvor u eliptični snop manjeg poprečnog presjeka (22 μm × 66 μm). Laserska energija unutar ovog eliptičnog snopa se distribuira prema normalnoj distribuciji, osiguravajući konzistentan intenzitet osvjetljenja ćelija koje prolaze kroz područje detekcije lasera. S druge strane, optički sistem se sastoji od više setova sočiva, rupica i filtera, koji se grubo mogu podijeliti u dvije grupe: uzvodno i nizvodno od protočne komore.
Optički sistem ispred protočne komore sastoji se od sočiva i rupice. Glavna funkcija sočiva i rupice (obično dva sočiva i rupica) je fokusiranje laserskog snopa kružnog poprečnog presjeka koji emituje laserski izvor u eliptični snop manjeg poprečnog presjeka. Ovo raspoređuje lasersku energiju prema normalnoj distribuciji, osiguravajući konzistentan intenzitet osvjetljenja ćelija u području detekcije lasera i minimizirajući interferenciju od zalutale svjetlosti.
Postoje tri glavne vrste filtera:
1: Dugopropusni filter (LPF) - propušta samo svjetlost s valnim duljinama većim od određene vrijednosti.
2: Kratkopropusni filter (SPF) - propušta samo svjetlost s valnim dužinama ispod određene vrijednosti.
3: Propusni filter (BPF) - propušta samo svjetlost u određenom rasponu valnih dužina.
Različite kombinacije filtera mogu usmjeriti fluorescentne signale na različitim talasnim dužinama na pojedinačne fotomultiplikatorske cijevi (PMT). Na primjer, filteri za detekciju zelene fluorescencije (FITC) ispred PMT-a su LPF550 i BPF525. Filteri koji se koriste za detekciju narandžasto-crvene fluorescencije (PE) ispred PMT-a su LPF600 i BPF575. Filteri za detekciju crvene fluorescencije (CY5) ispred PMT-a su LPF650 i BPF675.
Protočna citometrija se uglavnom koristi za sortiranje ćelija. S napretkom računarske tehnologije, razvojem imunologije i izumom tehnologije monoklonskih antitijela, njena primjena u biologiji, medicini, farmaciji i drugim oblastima postaje sve raširenija. Ove primjene uključuju analizu ćelijske dinamike, apoptozu ćelija, tipizaciju ćelija, dijagnozu tumora, analizu efikasnosti lijekova itd.
Vrijeme objave: 21. septembar 2023.
