(Protočna citometrija, FCM) je ćelijski analizator koji mjeri intenzitet fluorescencije obojenih ćelijskih markera. To je visokotehnološka tehnologija razvijena na osnovu analize i sortiranja pojedinačnih ćelija. Može brzo da izmeri i klasifikuje veličinu, unutrašnju strukturu, DNK, RNK, proteine, antigene i druga fizička ili hemijska svojstva ćelija, i može se zasnivati na prikupljanju ovih klasifikacija.
Protočni citometar se uglavnom sastoji od sljedećih pet dijelova:
1 Protočna komora i fluidički sistem
2 Laserski izvor svjetlosti i sistem za oblikovanje zraka
3 Optički sistem
4 Elektronika, sistem za skladištenje, prikaz i analizu
5 Sistem za sortiranje ćelija
Među njima, laserska ekscitacija u laserskom izvoru svjetlosti i sistemu za formiranje zraka je glavno mjerenje fluorescentnih signala u protočnoj citometriji. Intenzitet ekscitacionog svjetla i vrijeme ekspozicije povezani su sa intenzitetom fluorescentnog signala. Laser je koherentni izvor svjetlosti koji može pružiti jednovalnu dužinu, visokog intenziteta i visoko stabilno osvjetljenje. To je idealan izvor pobudne svjetlosti za ispunjavanje ovih zahtjeva.
Između laserskog izvora i protočne komore nalaze se dva cilindrična sočiva. Ova sočiva fokusiraju laserski snop kružnog poprečnog preseka koji emituje laserski izvor u eliptični snop manjeg poprečnog preseka (22 μm × 66 μm). Laserska energija unutar ovog eliptičnog snopa distribuira se prema normalnoj distribuciji, osiguravajući konzistentan intenzitet osvjetljenja ćelija koje prolaze kroz područje laserske detekcije. S druge strane, optički sistem se sastoji od više setova sočiva, rupica i filtera, koji se grubo mogu podijeliti u dvije grupe: uzvodno i nizvodno od protočne komore.
Optički sistem ispred protočne komore sastoji se od sočiva i rupe. Glavna funkcija sočiva i otvora (obično dva sočiva i rupica) je fokusiranje laserskog snopa kružnog poprečnog presjeka kojeg emituje laserski izvor u eliptični snop manjeg poprečnog presjeka. Ovo distribuira energiju lasera u skladu sa normalnom distribucijom, osiguravajući konzistentan intenzitet osvjetljenja za ćelije u području laserske detekcije i minimizirajući smetnje od zalutalog svjetla.
Postoje tri glavne vrste filtera:
1: Dugopropusni filter (LPF) - propušta samo svjetlost sa talasnim dužinama većim od određene vrijednosti.
2: Short-pass filter (SPF) - propušta samo svjetlost sa talasnim dužinama ispod određene vrijednosti.
3: Bandpass filter (BPF) - dozvoljava prolazak samo svjetlosti u određenom opsegu talasnih dužina.
Različite kombinacije filtera mogu usmjeriti fluorescentne signale na različitim talasnim dužinama na pojedinačne fotomultiplikatorske cijevi (PMT). Na primjer, filteri za detekciju zelene fluorescencije (FITC) ispred PMT-a su LPF550 i BPF525. Filteri koji se koriste za detekciju narandžasto-crvene fluorescencije (PE) ispred PMT-a su LPF600 i BPF575. Filteri za detekciju crvene fluorescencije (CY5) ispred PMT-a su LPF650 i BPF675.
Protočna citometrija se uglavnom koristi za sortiranje ćelija. Sa napretkom kompjuterske tehnologije, razvojem imunologije i pronalaskom tehnologije monoklonskih antitijela, njena primjena u biologiji, medicini, farmaciji i drugim oblastima postaje sve raširenija. Ove aplikacije uključuju analizu stanične dinamike, ćelijsku apoptozu, tipizaciju ćelija, dijagnozu tumora, analizu efikasnosti lijekova itd.
Vrijeme objave: Sep-21-2023
