(Cytometry Flow, FCM) je ćelijski analizator koji mjeri intenzitet fluorescencije obojenih ćelijskih markera. To je visokotehnološka tehnologija razvijena na osnovu analize i sortiranja pojedinačnih ćelija. Može brzo mjeriti i klasificirati veličinu, unutrašnju strukturu, DNK, RNA, proteine, antigene i druga fizička ili hemijska svojstva ćelija i može se temeljiti na prikupljanju ovih klasifikacija.
Citometar protoka uglavnom se sastoji od sljedećih pet dijelova:
1 protočna komora i sistem tekućine
2 laserski sistem za oblikovanje svjetla i oblikovanja snopa
3 optički sistem
4 Elektronika, skladišni, prikaz i sistem analize
5 sistem za sortiranje ćelija
Među njima, lasersko uzbuđenje u sistem laserskog svjetla i sustavom oblikovanja snopa je glavno mjerenje fluorescentnih signala u citometriji protoka. Intenzitet uzbuđenja i vremena izlaganja povezani su sa intenzitetom fluorescentnog signala. Laser je koherentan izvor svjetlosti koji može pružiti jedno-talasnu dužinu, visokog intenziteta i visokog stabilnosti. To je idealan izvor svjetla za uzbuđenje kako bi udovoljio tim zahtjevima.
Postoje dvije cilindrične leće između laserskog izvora i komore protoka. Ove leće fokusiraju laserski snop s kružnim presjekom koji se emitira iz laserskog izvora u eliptični snop s manjim presjekom (22 μm × 66 μm). Laserska energija unutar ove eliptične grede distribuira se prema normalnoj distribuciji, osiguravajući konzistentni intenzitet osvjetljenja za ćelije koje prolaze kroz područje za otkrivanje lasera. S druge strane, optički sustav sastoji se od više skupova sočiva, prstenika i filtera, koji mogu biti otprilike podijeljeni u dvije grupe: uzvodno i nizvodno od protočnog komora.
Optički sustav ispred komore za protok sastoji se od objektiva i otvora. Glavna funkcija sočiva i otvora (obično dvije leće i pilinga) je fokusiranje laserskog snopa kružnim presjekom koji je laserski izvor koji je u eliptičnom snopu emitirao u eliptičnom snopu s manjim presjekom. Ovo distribuira lasersku energiju prema normalnoj distribuciji, osiguravajući konzistentni intenzitet osvjetljenja za ćelije preko laserskog područja otkrivanja i minimiziranje smetnji od svjetla za ludravo svjetlo.
Postoje tri glavne vrste filtera:
1: Dugi prolazni filter (LPF) - Omogućuje samo svjetlost sa valnim duljinama veće od određene vrijednosti za prolazak.
2: Kratki prolazni filter (SPF) - Omogućuje svjetlost sa talasnim dužinama ispod određene vrijednosti za prolazak kroz.
3: Bandss Filter (BPF) - Omogućuje samo svjetlost u specifičnom rasponu talasne dužine.
Različite kombinacije filtera mogu usmjeriti fluorescentne signale na različitim talasnim duljinama na pojedinačne fotomultiplipnije cijevi (PMS). Na primjer, filtri za otkrivanje zelene fluorescencije (fitc) ispred PMT-a su LPF550 i BPF525. Filtri koji se koriste za otkrivanje narančasto-crvene fluorescencije (PE) ispred PMT-a su LPF600 i BPF575. Filtri za otkrivanje crvene fluorescencije (CY5) ispred PMT-a su LPF650 i BPF675.
Citometrija protoka uglavnom se koristi za sortiranje ćelija. Sa napretkom računarske tehnologije, razvoju imunologije i izumivanje monoklonske antitijeloške tehnologije, njegove primjene u biologiji, lijekovima, ljekarni i drugim poljima postaju sve rasprostranjeni. Ove aplikacije uključuju analizu dinamike ćelija, apoptozu ćelije, tipka za mobitel, dijagnozu tumora, analizu efikasnosti droge itd.
Vrijeme objavljivanja: Sep-21-2023
